Хор был создан в 1996 г. в храме Успения Пресвятой Богородицы на подворье монастыря Оптина Пустынь в Санкт-Петербурге. Помимо древнерусских певческих стилей (знаменного, путевого, демественного, строчного, знаменного многоголосия и партеса), коллектив исполняет распевы православных певческих традиций (греческой, сербской, болгарской и грузинской), монастырские подобны, современные аранжировки древних распевов, а также духовные песнопения русских композиторов.
Художественный руководитель и регент - Александр Семенов - окончил дирижерско-хоровой факультет и факультатив симфонического дирижирования Петербургской Консерватории. Ее же выпускниками являются все члены хора «Оптина пустынь»: заслуженный артист России, солист Государственной певческой Капеллы и Мариинского театра Владимир Миллер (бас-профундо), лауреаты международных конкурсов - Александр Горбатенко (контр-тенор), Дмитрий Шишкин (бас), Дмитрий Писарев (баритон), Борис Петров (баритон), Евгений Михеев (тенор), Андрей Иванушкин (тенор), Виктор Хапров (бас), Сергей Григорьев (регент и бас).